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发布时间:2022-06-28 17:54:15
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。***组原位杂交(Genomeinsituhybridization,GISH)技术是20世纪80年代末发展起来的一种原位杂交技术。
***原位杂交(Tissue in situ hybridization)简称原位杂交,指***或细胞的原位杂交,它与菌落原位杂交不同,菌落原位杂交需裂解***释出DNA,然后进行杂交,而原位杂交是经适当处理后,使细胞通透性增加,让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交,因此原位杂交可以确定探针互补序列在胞内的空间位置,这一点具有重要的生物学和病理学意义。④多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列。
武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。荧光原位杂交是近年来发展起来的检测染色体异常的新型技术,在产前诊断中也得到了广泛的应用,成为传统细胞遗传学检测的一种重要补充。用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA,也可以是RNA探针。本文着重介绍了FISH技术的原理及探针的分类,FISH技术在染色体病产前诊断中的应用及前景。
FISH选用的标本既可以是分裂细胞也可以是间期细胞。荧光原位杂交技术是一种重要的非性原位杂交技术,原理是利用报告分子(如生物素、等)标记核酸探针,然后将探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA杂交,若两者同源互补,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。近年来,随着FISH所应用的探针种类的不断增多,如DAPI /GFP/FITC/PI/Texas-Red等,使得普通的宽场荧光显微镜即可获得高质量的FISH信号。若采用多种方法标记DNA探针,故一次杂交可以同时观察多个探针的信号,使用数字成像系统(CCD/CMOS),分别多次摄取的信号储存在计算机内,通过软件系统的处理,终形成一个复合的多颜色的图像。
显色以下各步均在室温下进行。杂交与显色杂交将已标记的探针加入预杂交液即成为杂交液(探针浓度为1μg/m1),切片经2×***短暂浸洗后,滴加杂交液,于湿盒内置37℃或42℃孵育过夜。
(1)缓冲液I洗1min。
(2)用含2%正常羊和0.3%TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。
(3)用含1%正常羊和0.3%TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。
(4)将稀释液滴加在切片上,封口膜覆盖,湿盒内4℃孵育过夜。
(5)缓冲液I洗10min。
(6)缓冲液Ⅱ洗10min。
(7)加显色液,封口膜覆盖,避光室温孵育2~20h,随时镜检,当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。
显色液临用前配,其配方为:①NBT 45μl;②X-Phospllate液 35μl;③左旋咪唑 2.4mg;④缓冲液Ⅱ 加至10ml。
(8)常规脱水、透明、封固。
结果:杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。
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